Per a la microscòpia de fluorescència, la mostra emet llum. Que tal això? Afegint molècules de colorant a la mostra. La molècula de colorant normalment s'excita quan absorbeix energia lluminosa, de manera que allibera qualsevol energia capturada en forma de llum. L'energia lluminosa alliberada per una molècula excitada té una longitud d'ona més gran que la llum que irradia. Les molècules de colorant solen ser colorants fluorescents que fan fluorescència quan s'exposen a una longitud d'ona específica de la llum. La imatge formada és d'una etiqueta de colorant fluorescent que emet llum
El principi d'aquest mecanisme de treball és que un microscopi de fluorescència exposa una mostra a llum ultraviolada o ultraviolada o llum blava, formant així una imatge de la mostra emesa per la fluorescència. Disposen d'una làmpada d'arc de vapor de mercuri que produeix un intens feix de llum que travessa un filtre d'excitació. La funció del filtre d'excitació és transmetre longituds d'ona específiques a la mostra tenyida de colorant fluorescent, produint així una imatge de l'etiqueta del colorant fluorescent.
Després de la lent de l'objectiu, hi ha un filtre de barrera que té com a finalitat principal eliminar qualsevol radiació UV que pugui ser perjudicial per a la llum de l'observador, reduint així el contrast de la imatge.
Aplicacions deMicroscòpia de fluorescència
Per visualitzar agents bacterians com Mycobacterium tuberculosis.
S'utilitza en tècniques d'immunofluorescència per identificar anticossos específics produïts contra antígens/patògens bacterians mitjançant l'etiquetatge dels anticossos amb colorants fluorescents.
S'utilitza en la investigació ecològica per identificar i observar microorganismes marcats amb colorants fluorescents
També pot diferenciar entre bacteris morts i vius pel color que emeten quan es tracten amb una taca especial
A més dels microscopis comentats anteriorment, hi ha un microscopi menys utilitzat anomenat microscòpia de contrast d'interferència diferencial. És molt semblant a la microscòpia de contrast de fase, on la imatge està formada per raigs de llum que es desvien o no es desvien. La diferència és que aquí es llancen dos feixos de llum sobre la mostra i es focalitzen mitjançant un prisma. Un feix travessa el prisma per arribar a la mostra, mentre que l'altre feix travessa una zona transparent de la diapositiva sense la mostra. Aleshores, els dos feixos es fusionen i interfereixen entre si per formar una imatge. Es pot utilitzar per veure estructures cel·lulars d'exemplars sense tacar, com ara endospores, parets cel·lulars bacterianes, nuclis i grànuls.
