La majoria dels components cel·lulars són incolors i no es poden distingir clarament amb un microscopi. La premissa bàsica de la microscòpia de fluorescència és la tinció dels components amb colorants.
Els colorants fluorescents, també coneguts com fluoròfors o colorants fluorescents, són molècules que absorbeixen llum d'excitació d'una determinada longitud d'ona (generalment UV) i emeten llum d'una longitud d'ona més llarga després d'un breu retard. El retard entre l'absorció i l'emissió és insignificant, normalment de l'ordre de nanosegons.
La llum emesa es pot filtrar de la llum d'excitació per revelar la ubicació del fluoròfor.
La microscòpia de fluorescència utilitza una llum més intensa per il·luminar la mostra. Aquesta llum excita el material fluorescent de la mostra, que després emet llum a una longitud d'ona més llarga.
La imatge resultant es basa en la longitud d'ona d'emissió d'una segona font de llum o substància fluorescent diferent de la llum utilitzada originalment per il·luminar i excitar la mostra.
processament
La llum a la longitud d'ona d'excitació es centra en la mostra a través de la lent de l'objectiu. La fluorescència emesa per la mostra es centra en el detector a través de la lent de l'objectiu. Com que la major part de la llum d'excitació es transmet a través de la mostra, només la llum d'excitació reflectida arriba a l'objectiu juntament amb la llum emesa.
forma
"Microscòpia de fluorescència" fa referència a qualsevol microscopi que utilitza la fluorescència per generar imatges, ja sigui un dispositiu més senzill com un microscopi epifluorescència, o un disseny més complex com un microscopi confocal, que utilitza el seccionament òptic per obtenir una millor resolució. Imatge de fluorescència.
La majoria dels microscopis de fluorescència utilitzats són microscopis d'epifluorescència, on l'excitació dels fluoròfors i la detecció de fluorescència s'aconsegueixen a través del mateix camí òptic (és a dir, a través de la lent de l'objectiu).
